高保真聚合酶的特征概述
更新時間：2017-07-20 點擊次數(shù)：1508
高保真聚合酶的校正作用，與其它在PCR反應(yīng)中使用的聚合酶相比，Pfu聚合酶有著出色的熱穩(wěn)定性，以及*的“校正作用”。與TaqDNA聚合酶不同，PfuDNA聚合酶具有3'-5'外切酶的即時校正活性，可以即時的識別并切除錯配核苷酸。因此，使用PfuDNA聚合酶進行PCR反應(yīng)，比使用Taq聚合酶有較低的錯配突變幾率，保真性更高。
高保真聚合酶共性，此酶zui早在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)，以后陸續(xù)在其他原核生物及微生物中找到。這類酶的共同性質(zhì)是：[1]以脫氧核苷酸三磷酸（dNTP）為前體催化合成DNA;[2]需要模板和引物的存在;[3]不能起始合成新的DNA鏈；[4]催化dNTP加到生長中的DNA鏈的3'-OH末端；[5]催化DNA合成的方向是5'→3'。下面首先介紹大腸桿菌的DNA聚合酶，然后簡略說明一下其他原核生物的DNA聚合酶和真核生物DNA聚合酶。
高保真聚合酶功能，聚合作用，在引物RNA'-OH末端，以dNTP為底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐個將核苷酸加上去，就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的專一性主要表現(xiàn)為新進入的脫氧核苷酸必須與模板DNA配對時才有催化作用。dNTP進入結(jié)合位點后，可能使酶的構(gòu)象發(fā)生變化，促進3'-OH與5'-PO4結(jié)合生成磷酸二酯鍵。若是錯誤的核苷酸進入結(jié)合位點，則不能與模板配對，無法改變酶的構(gòu)象而被3'-5'外切酶活性位點所識別并切除之。
微信咨詢
當(dāng)前位置：